Low concentrations of grape seed extract maintain osteoblast morphology, cell adhesion, and mineralization

Abstract The increase in life expectancy has led to a higher incidence of osteoporosis, characterized by an imbalance in bone remodeling. Several drugs are used for its treatment, but most promote undesirable side effects. The present investigation evaluated the effects of two low concentrations of grape seed extract (GSE) rich in proanthocyanidins on MC3T3-E1 osteoblastic cells. The cells were cultured in an osteogenic medium and divided into control (C), 0.1 µg/mL GSE (GSE0.1), and 1.0 µg/mL GSE (GSE1.0) groups to evaluate cell morphology, adhesion, and proliferation, in situ alkaline phosphatase (ALP) detection, mineralization and immunolocalization of osteopontin (OPN). The data obtained were analyzed by statistical tests for a significance of 5%. Cell morphology was maintained with both GSE concentrations, whereas cell adhesion significantly increased within three days in all groups. Cell proliferation increased significantly at seven days of culture, followed by a significant decrease in all experimental periods, with no statistical difference among them. In situ detection of ALP and mineralization increased with time, but within each period, no statistical differences among groups were observed. The expression of osteopontin was distributed regularly with more intensity after 24 hours in the GSE0.1 group. After three days, OPN expression was more intense in the control group, followed by GSE0.1 and GSE1.0 groups. Data obtained suggest that low concentrations of GSE do not affect the morphology and may stimulate the functional activity of osteoblastic cells.

Resumo O aumento da expectativa de vida tem levado a uma maior incidência de osteoporose, caracterizada por um desequilíbrio na remodelação óssea. Vários medicamentos são utilizados para o seu tratamento, contudo, a maioria promove efeitos colaterais indesejáveis. A presente investigação avaliou os efeitos de duas baixas concentrações de extrato de semente de uva (GSE) rico em proantocianidinas em células osteoblásticas MC3T3-E1. As células foram cultivadas em meio osteogênico e divididas em grupos controle (C), 0,1 µg/mL de GSE (GSE0.1) e 1,0 µg/mL de GSE (GSE1.0) para avaliar morfologia, adesão e proliferação celular, detecção in situ de fosfatase alcalina (ALP), mineralização e imunolocalização da proteína osteopontina (OPN). Os dados obtidos foram analisados por testes estatísticos para um nível de significância de 5%. A proliferação celular aumentou significativamente aos sete dias de cultura, seguido de uma diminuição significativa em todos os períodos experimentais, sem diferença estatística entre eles. A detecção in situ de ALP e mineralização aumentou com o tempo, mas dentro de cada período não foram observadas diferenças estatísticas entre os grupos. A morfologia celular foi mantida com ambas as concentrações de GSE, enquanto a adesão celular aumentou significativamente aos três dias em todos os grupos. A expressão de osteopontina distribuiu-se regularmente com maior intensidade após 24 horas no grupo GSE0.1. Após três dias, a expressão de OPN foi mais intensa no grupo controle, seguida pelos grupos GSE0.1 e GSE1.0. Os dados obtidos sugerem que baixas concentrações de GSE não afetam a morfologia e podem estimular a atividade funcional das células osteoblásticas.

In Vitro Effect of Low-Level Laser Therapy on Undifferentiated Mouse Pulp Cells / Efeito in Vitro da Laserterapia de Baixa Intensidade em Células Pulpares Indiferenciadas de Camundongo

Low-level laser therapy has been investigated as a possible stimulus for enhancement of proliferation and differentiation of various cell types, but few reports relate undifferentiated mouse pulp cells (OD-21) response to irradiation in in vitro models. The aim of this study was to analyze the influence of low-level laser therapy (λ=660 nm), with three different irradiation times, on the behavior of OD-21 cell line. The cells were cultivated and divided into three groups: non-irradiated/control (group I); irradiated with 88 s (group II); irradiated with 177 s (group III) and irradiated with 265 s (group IV). Cell growth and viability were assessed after 7 and 10 days. Data were analyzed by Kruskal-Wallis and MannWhitney tests (α=.05). At day 7, there was a higher cell growth in groups I and II, as compared to group IV (p<.01). At the 10th day, group I showed a higher cell growth as compared to group II (p<.05). Cell viability in group IV was significantly lower at the 7th day, as compared to groups I (p<.001), II (p<.01) and III (p<.001). Cell viability in all the groups was over 80%, except in group IV at day 7. Irradiation time of group I influenced positively the proliferation and viability of OD-21 cells in late cell culture period. (AU)

A terapia a laser de baixa intensidade tem sido investigada como possível estímulo para aumento da proliferação e diferenciação de vários tipos de células, mas poucos relatos relacionam a resposta de células indiferenciadas da polpa dentária de camundongos (OD-21) à irradiação em modelos in vitro. O objetivo deste estudo foi analisar a influência do laser de baixa intensidade (λ=660 nm), com três períodos de irradiação diferentes, no comportamento das células da linhagem OD-21. As células foram cultivadas e distribuídas em três grupos: não irradiado / controle (grupo I); irradiado com 88 s (grupo II); irradiado com 177 s (grupo III) e irradiado com 265 s (grupo IV). O crescimento e a viabilidade celular foram avaliados após 7 e 10 dias. Os dados foram analisados pelos testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney (α = 0,05). No dia 7, houve crescimento celular maior nos grupos I e II, em comparação ao grupo IV (p <0,01). No décimo dia, o grupo I apresentou crescimento celular superior ao grupo II (p <0,05). A viabilidade celular no grupo IV foi significativamente menor no sétimo dia, em comparação aos grupos I (p <0,001), II (p <0,01) e III (p <0,001). A viabilidade celular em todos os grupos foi superior a 80%, exceto no grupo IV no dia 7. O tempo de irradiação do grupo I influenciou positivamente a proliferação e a viabilidade das células OD-21 no período mais tardio da cultura celular.A terapia a laser de baixa intensidade tem sido investigada como possível estímulo para aumento da proliferação e diferenciação de vários tipos de células, mas poucos relatos relacionam a resposta de células indiferenciadas da polpa dentária de camundongos (OD-21) à irradiação em modelos in vitro. O objetivo deste estudo foi analisar a influência do laser de baixa intensidade (λ=660 nm), com três períodos de irradiação diferentes, no comportamento das células da linhagem OD-21. As células foram cultivadas e distribuídas em três grupos: não irradiado / controle (grupo I); irradiado com 88 s (grupo II); irradiado com 177 s (grupo III) e irradiado com 265 s (grupo IV). O crescimento e a viabilidade celular foram avaliados após 7 e 10 dias. Os dados foram analisados pelos testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney (α = 0,05). No dia 7, houve crescimento celular maior nos grupos I e II, em comparação ao grupo IV (p <0,01). No décimo dia, o grupo I apresentou crescimento celular superior ao grupo II (p <0,05). A viabilidade celular no grupo IV foi significativamente menor no sétimo dia, em comparação aos grupos I (p <0,001), II (p <0,01) e III (p <0,001). A viabilidade celular em todos os grupos foi superior a 80%, exceto no grupo IV no dia 7. O tempo de irradiação do grupo I influenciou positivamente a proliferação e a viabilidade das células OD-21 no período mais tardio da cultura celular. (AU)

Impact of calcium aluminate cement with additives on dental pulp-derived cells

Abstract Calcium aluminate cement (CAC) has been highlighted as a promising alternative for endodontic use aiming at periapical tissue repair. However, its effects on dental pulp cells have been poorly explored. Objective: This study assessed the impact of calcium chloride (CaCl2) and bismuth oxide (Bi2O3) or zinc oxide (ZnO) additives on odontoblast cell response to CAC. Methodology: MDPC-23 cells were exposed for up to 14 d: 1) CAC with 2.8% CaCl2 and 25% ZnO (CACz); 2) CAC with 2.8% CaCl2 and 25% Bi2O3 (CACb); 3) CAC with 10% CaCl2 and 25% Bi2O3 (CACb+); or 4) mineral trioxide aggregate (MTA), placed on inserts. Non-exposed cultures served as control. Cell morphology, cell viability, gene expression of alkaline phosphatase (ALP), bone sialoprotein (BSP), and dentin matrix protein 1 (DMP-1), ALP activity, and extracellular matrix mineralization were evaluated. Data were compared using ANOVA (α=5%). Results: Lower cell density was detected only for MTA and CACb+ compared with Control, with areas showing reduced cell spreading. Cell viability was similar among groups at days one and three (p>0.05). CACb+ and MTA showed the lowest cell viability values at day seven (p>0.05). CACb and CACb+ promoted higher ALP and BSP expression compared with CACz (p<0.05); despite that, all cements supported ALP activity. Matrix mineralization were enhanced in CACb+ and MTA. Conclusion: In conclusion, CAC with Bi2O3, but not with ZnO, supported the expression of odontoblastic phenotype, but only the composition with 10% CaCl2 promoted mineralized matrix formation, rendering it suitable for dentin-pulp complex repair.

Effect of grape seed extract (GSE) on functional activity and mineralization of OD-21 and MDPC-23 cell lines

Abstract Recent studies on functional tissue regeneration have focused on substances that favor cell proliferation and differentiation, including the bioactive phenolic compounds present in grape seed extract (GSE). The aim of this investigation was to evaluate the stimulatory potential of GSE in the functional activity of undifferentiated pulp cells and odontoblast-like cells. OD-21 and MDPC-23 cell lines were cultivated in odontogenic medium until subconfluence, seeded in 24-well culture plates in a concentration of 2x104/well and divided into: 1) OD-21 without GSE; 2) OD-21+10 µg/mL of GSE; 3) MDPC-23 without GSE; 4) MDPC-23+10 µg/mL of GSE. Cell proliferation, in situ detection of alkaline phosphatase (ALP) and total protein content were assessed after 3, 7 and 10 days, and mineralization was evaluated after 14 days. The data were analyzed by ANOVA statistical tests set at a 5% level of significance. Results revealed that cell proliferation increased after 10 days, and protein content, after 7 days of culture in MDPC-23 cells. In situ ALP staining intensity was higher in undifferentiated pulp cells and odontoblast-like cells after 7 and 10 days, respectively. A discrete increase in MDPC-23 mineralization after GSE treatment was observed despite OD-21 cells presenting a decrease in mineralized nodule deposits. Data suggest that GSE favors functional activity of differentiated cells more broadly than undifferentiated cells (OD-21). More studies with different concentrations of GSE must be conducted to confirm its benefits to cells regarding dentin regeneration.

In vitro evaluation of the odontogenic potential of mouse undifferentiated pulp cells

The aim of this study was to evaluate the odontogenic potential of undifferentiated pulp cells (OD-21 cell line) through chemical stimuli in vitro. Cells were divided into uninduced cells (OD-21), induced cells (OD-21 cultured in supplemented medium/OD-21+OM) and odontoblast-like cells (MDPC-23 cell line). After 3, 7, 10 and 14 days of culture, it was evaluated: proliferation and cell viability, alkaline phosphatase activity, total protein content, mineralization, immunolocalization of dentin matrix acidic phosphoprotein 1 (DMP1), alkaline phosphatase (ALP) and osteopontin (OPN) and quantification of genes ALP, OSTERIX (Osx), DMP1 and runt-related transcription factor 2 (RUNX2) through real-time polymerase chain reaction (PCR). Data were analyzed by Kruskal-Wallis and Mann-Whitney U tests (p<0.05). There was a decrease in cell proliferation in OD-21 + OM, whereas cell viability was similar in all groups, except at 7 days. The amount of total protein was higher in group OD-21 + OM in all periods; the same occurred with ALP activity after 10 days when compared with OD-21, with no significant differences from the MDPC-23 group. Mineralization was higher in OD-21+OM when compared with the negative control. Immunolocalization demonstrated that DMP1 and ALP were highly expressed in MDPC-23 cells and OD-21 + OM cells, whereas OPN was high in all groups. Real-time PCR revealed that DMP1 and ALP expression was higher in MDPC-23 cell cultures, whereas RUNX2 was lower for these cells and higher for OD-21 negative control. Osx expression was lower for OD-21 + OM. These results suggest that OD-21 undifferentiated pulp cells have odontogenic potential and could be used in dental tissue engineering.

O objetivo foi avaliar o potencial odontogênico de células indiferenciadas da polpa (OD-21) por meio de indução química in vitro. As células foram divididas em grupos: controle (OD-21), induzido (OD-21 em meio suplementado/OD-21 + OM), e células odontoblastóides (MDPC-23). Após 3, 7, 10 e 14 dias, avaliou-se proliferação e viabilidade celular, proteína total e fosfatase alcalina (ALP), mineralização, imunolocalização da proteína da matriz dentinária 1 (DMP1), ALP e osteopontina (OPN), assim como a expressão dos genes ALP, OSTERIX (Osx), DMP1 e fator de transcrição RUNX2 por PCR em tempo real. Os dados foram avaliados pelo teste de Kruskal-Wallis seguido pelo teste de Mann-Whitney U (p<0.05). Houve diminuição na proliferação celular em OD-21 + OM, com viabilidade celular similar em todos os grupos, exceto aos sete dias. O conteúdo de proteína total foi maior no grupo OD-21 + OM em todos os períodos; o mesmo ocorreu com a atividade de ALP quando comparada com o grupo OD-21, além de apresentar resultados similares ao grupo MDPC-23. A mineralização foi maior em OD-21 + OM quando comparada com o controle negativo. A imunolocalização demonstrou expressão de DMP1 e ALP em MDPC-23 e OD-21 + OM, enquanto que todos os grupos foram positivos para OPN. A expressão gênica de DMP1 e ALP foi maior nas culturas de MDPC-23, enquanto que a de RUNX2 foi menor para estas células e maior no controle negativo. A expressão de OSTERIX foi menor em OD-21 + OM quando comparada aos outros grupos. Sugere-se que as células indiferenciadas da polpa da linhagem OD-21 apresentam potencial odontogênico e poderiam ser usadas para a engenharia tecidual.